Swant抗體的制備工藝要求涉及多個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié),包括抗原設(shè)計(jì)與免疫、雜交瘤技術(shù)、抗體純化與質(zhì)控等。以下是具體分析:
1.抗原設(shè)計(jì)與免疫
抗原選擇:Swant抗體針對特定鈣結(jié)合蛋白(如Parvalbumin)設(shè)計(jì),需確保抗原的高純度(>90%)和特異性。例如,其單克隆抗體通過識(shí)別人源PV蛋白C端121-132氨基酸序列實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)結(jié)合。
動(dòng)物免疫:選用小鼠或豚鼠作為宿主動(dòng)物,免疫時(shí)需加入福氏佐劑以增強(qiáng)抗原性,并通過皮下或背部多點(diǎn)注射延長抗原在體內(nèi)的存留時(shí)間。
2.細(xì)胞融合與篩選
雜交瘤技術(shù):將免疫后的動(dòng)物脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,形成既能無限增殖又能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。此過程需嚴(yán)格無菌操作,并使用HAT培養(yǎng)基篩選成功融合的細(xì)胞。
克隆化與驗(yàn)證:通過有限稀釋法實(shí)現(xiàn)單克隆化,并利用ELISA、免疫組化等方法檢測抗體特異性。例如,Swant的抗PV單抗經(jīng)WB/IHC雙重驗(yàn)證,確保無交叉反應(yīng)。
3.Swant抗體純化與質(zhì)控
層析工藝:采用Protein A親和層析捕獲抗體,結(jié)合離子交換和凝膠過濾層析進(jìn)一步去除宿主細(xì)胞蛋白(HCP)、DNA殘留及聚集體。最終產(chǎn)品純度需>95%。
病毒清除:通過低pH孵育(pH 3.0–4.0)和除病毒過濾器組合,確保脂包膜病毒的安全性。
穩(wěn)定性保障:成品需在-20℃避光保存,活性維持>90%長達(dá)24個(gè)月。加速穩(wěn)定性試驗(yàn)驗(yàn)證其耐受溫度波動(dòng)的能力。
4.分裝與定制服務(wù)
凍干處理:部分產(chǎn)品以凍干形式分裝(如100μl/支),重構(gòu)后用于實(shí)驗(yàn),避免防腐劑干擾。
靈活規(guī)格:提供50μg試銷裝及標(biāo)記服務(wù)(HRP/FITC/Cy3),滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。
