1、免疫脾細胞的制備

   制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。

2、骨髓瘤細胞的培養與篩選

   在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養基中存活）。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養液在細胞培養瓶中培養，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細胞處于對數生長期。

3、細胞融合的關鍵:

①技術上的誤差常常導致融合的失敗。②融合試驗zui大的失敗原因是污染，融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境，以及適宜的無菌操作技術。

4、陽性克隆的篩選

   通常在融合后10天作*次檢測，過早容易出現假陽性。檢測方法應靈敏、準確、而且簡便快速。具體應用的方法應根據抗原的性質，以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫熒光法等。

5、克隆化
 
   克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體?？寺』瘧M早進行并反復篩選。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩定的，有丟失染色體的傾向。反復克隆化后可獲得穩定的雜交瘤細胞株。

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